GFP抗体应用及常见问题解答

        绿色荧光蛋白（GFP）是来自维多利亚多管发光水母 Aequorea victoria的一个小分子量蛋白质。它是由Osamu Shimomura发现的，当被蓝色到紫外区的光刺激时发出绿色荧光。相关荧光蛋白在许多其它海洋生物中发现，例如珊瑚，海葵和海紫罗兰。GFP非常适合用于蛋白质标记，这是它取得空前成功的最大原因之一。虽然它非常适合实时成像，但是在使用方法中如果导致GFP荧光淬灭，那么就有必要使用抗GFP抗体。组织样品，组织学制剂和使用固定剂的冷冻保存，通常导致GFP荧光完全或部分损失，则需要使用GFP抗体来获得可靠的实验结果。通过免疫印迹检测GFP标签蛋白，免疫沉淀检测蛋白质-蛋白质相互作用，这些实验也必须使用GFP抗体。GFP抗体有多克隆或单克隆抗体，适用于蛋白质印迹，免疫沉淀，免疫组化，免疫细胞化学定位和免疫吸附测定（ELISA），以检测GFP，GFP变体和GFP融合蛋白。

 

        GFP抗体使用量在增长，相应供应商的数量也在增加,有些供应商还提供GFP单结构域抗体或纳米抗体。这些抗体包括一个单一可变抗体结构域，这是一种骆驼来源的单结构域抗体。这些抗体比常规抗体小得多，而且有重要的用途。 Caussinus E等人已经率先发明deGradFP方法，该方法利用遗传编码方式，具体为在任何真核系统中，快速消耗GFP标签蛋白。此系统依赖于GFP单结构域抗体片段（vhhGFP4）融合到F-box结构域。此融合蛋白结合GFP并直接介导蛋白酶体降解。当GFP标记的蛋白是功能蛋白的唯一来源，那么基因功能的分析就不受残留蛋白的干扰。Ries等人使用GFP标签蛋白和分子量小、亲和力高的单结构域GFP抗体，在微管，神经元和酵母细胞研究中获得纳米级的分辨率。

 

关于GFP抗体的常见问题

 

我应该购买哪些供应商的GFP抗体？

        GFP抗体的使用方法是决定供应商的一个重要因素。供应商列出抗体最合适的使用方法，并且给出建议的稀释度。然而，抗体性能可能与系统和实验条件有关。许多供应商提供客户支持服务，这可以就他们公司抗体是否适合您的实验来给出建议。

 

GFP抗体也是别GFP变体吗？

        GFP抗体识别维多利亚多管发光水母（Aequorea victoria）GFP蛋白的其它变体。

 

为什么免疫印迹实验中GFP抗体无信号？

        免疫印迹实验中的信号缺失可能存在多种问题。转膜失败和转膜效率极差都导致无信号。转膜效率可以通过丽春-S染色进行检测。气泡的存在也会导致转膜效率差。GFP标记蛋白的表达水平可能太低，提高上样体积，并包含阳性对照。抗体浓度非常稀也可能是个问题，多试几个不同浓度的抗体来检测免疫印迹。此外，一个极小的可能性是，GFP标签没有同步表达和不表达也可导致信号缺失。

 

GFP信号太弱无法成像，是否可以增强信号？

        在某些实验条件下，GFP荧光会部分或完全丢失。因此，表达GFP标记蛋白的一些细胞结构可能难以显现或成像。GFP-Booster是骆驼来源的VHH结构域结合蛋白耦合了强信号荧光染料，能稳定并增强荧光信号。